Способ определения специфической активности препарата цетуксимаб биологическим методом на культуре клеток, включающий все перечисленные ниже этапы:
a) засев клеточной линии А431 в количестве 10000 клеток в 96-луночный планшет;
b) внесение серийных разведений цетуксимаба в диапазоне 7812,5 нг/мл – 30,5 нг/мл в трех повторностях, в планшет с клетками, через 4 часа после засева клеток;
c) инкубирование клеточной линии А431 в количестве 10000 клеток с серийным разведением цетуксимаба в диапазоне 7812,5 нг/мл – 30,5 нг/мл в 96-луночном планшете в течение 96 часов при 37°C в трех повторениях;
d) внесение 10 мкл MTT (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолий бромид) с концентрацией 5 мг/мл в каждую лунку с последующим инкубированием в течение 4 часов;
e) растворение кристаллов формазана в 100 мкл предварительно нагретого до 37°С лизирующего буфера с pH 4,7, состоящего из 100 мл ацетатного буферного раствора, включающего 2,05 г натрия ацетата безводного и 450 мл воды очищенной, 40 г натрия лаурилсульфата, 100 мл диметилформамида;
f) смешивание с помощью шейкера в течение 3 часов при поддержании скорости на уровне 450 об/мин и температуры 37°С;
g) проведение колориметрической оценки с использованием планшетного спектрофотометра при длине волны 570 нм.
